EK-910-100-JEM 脑炎病毒抗体检测试剂盒Mouse Anti-Japanese encephalitis virus (JEV) Ig’s ELISA kit
相关背景介绍：
猪是脑炎病毒（JEV）在自然界最重要的扩增动物。在怀孕母猪中此病很重要，因为感染导致死产和其他繁殖障碍；感染的公猪显示睾丸急性炎症。马被感染后，在中枢神经系统（CNS）产生病损，类似病损民发现于驴和猴。在其他动物中常呈亚临诊感染。JEV在自然界中的生存是经蚊、禽和哺乳动物中循环感染。JE对公共卫生关系量大。在流行区，猪总是密度很高，对蚊子的食物来源很有利。在易感猪中产生的病毒血症，保证感染的蚊虫不断生成。在和，从6月下旬蚊子开始活跃，根据纬度而有差异，稍后猪—蚊循环就很明显。在那时期，猪群中年轻的易感种猪比例很高，对JEV的被动免疫力经过冬季后已经消失。易感猪的集结在东南亚的热带地区不明显，因为在那里猪—蚊循环终年连续，使大多数年轻猪在早期获得了主动免疫力。流行病学模式在东南亚地区有差别，因为不同的气候条件改变了虫媒的活动。其他动物和不同蚊种能改变感染循环，这些是JE传递的因素。

测试原理
酶免测定法原理遵循典型的竞争抑制机制。存在于标准样本，对照样本和受测样本中的未标记的抗原与酶标抗原结合物之间相互竞争，争夺与事先包被在微孔板上的数量有限的抗体发生免疫反应的机会，然后通过洗涤和澄清去掉未被结合的物质。洗涤后再加入酶底物，*加入终止液终止酶促反应。吸光度可以通过酶标仪读取。形成的颜色的强度将与被检测的样本中的皮质醇的浓度成反比。
应用一套标准绘制标准曲线，从曲线上直接读取到受测样本和对照样本中的含量。
操作中的注意事项
1. 在使用本试剂盒之前，使用者要对本说明书有很深刻的了解，严格认真按照操作指南进行操作；
2. 为了评估结果的可靠性，对照样品含量应包含从高到低的各种水平；
3. 当要用到水稀释或重构时，请使用蒸馏水或者去离子水；
4. 为减少与潜在的有害物质接触，在处理试剂盒及人的样本的时候请戴上手套；
5. 所有试剂在使用前拿到室温下温和摇匀，避免反复冻融试剂和样本；
6. 在每次运行前确定校准曲线；
7. 每次检测时都应该包含校准液，并确保其检测值落在可信任区间内；
8. 不规范的程序操作，不 的吸取，不充分的洗涤以及不正确的储存都有可能导致测试值不在确定的范围内；
9. 读取微孔板时，微孔板中如果出现气泡将会影响吸光密度（OD 值），所以在读数前请小心移去微孔板中的气泡；
10. 底物溶液TMB 有很强的光敏感性，应保持避光保存。如果发现溶液现蓝色，可能是由于不稳定或者已经被污染，溶液将不能再使用；
11. 在调制底物溶液和终止液时，不要使液体接触到吸管的金属；
12. 为了避免污染，请使用一次性吸嘴吸取各种试剂和样品，对照样品等；
13. 切勿将不同批次的试剂组合使用，不使用任何过期产品；
14. 试剂盒必须当成是危险废弃物并遵照国家有关制度进行销毁。


检测流程
样本预处理：不需要
使用前将所有试剂恢复到室温状态，准备校准液、参照样本和待测样本，一式几份。一旦开始，直到测试完中间不能中断。
1. 配制皮质醇-HRP 结合物溶液和洗涤液。
2. 取出所需数量的微孔条。将不用的微孔条重新封装好放回冰箱。
3. 将各种校准液，参照样品和受测样品各吸取20μl 到相应的已做好标记的孔里面。
4. 吸取100μl 的结合物工作液到添加到每个孔（推荐使用多通道吸管）。
5. 室温下在板振动筛（大约200 转/分钟）下孵育45 分钟。
6. 用300μl 稀释的洗涤液冲洗所有的孔三次，用吸水纸吸干板上所有水分，并确保其被吸干。建议使用清洗器。
7. 吸取150μl 的TMB 底物溶液滴入到所有的孔中，并在中间间隔一段固定时间。
8. 室温下在板振动筛孵育15-20 分钟或者直到校准液A 呈现深蓝色，得到理想OD值。
9. 吸取50μl 的终止液滴到所有孔，间隔时间与第7 步相同。
10. 加入终止液20 分钟后，用微孔板读数器读取在450nm 滤光片下板孔的OD值。


注意事项
本检测试剂盒只能作为研究专用，请勿作诊断或其他用途！